DNA 메틸화 검사는 크게 두 단계로 나뉘어 집니다. 먼저 아황산염(Bisulfite)이라는 화학물질을 사용하여 메틸화 된 시토신과 메틸화 되지 않은 시토신을 구분합니다. 메틸화 되지 않은 시토신은 아황산염에 의해 우라실(Uracil, U)로 바뀌고, 메틸화 되어있는 시토신(C-CH3)은 그대로 시토신으로 남아있게 됩니다. 그 다음 메틸화 특이적인 중합효소연쇄반응 (Methylation specific PCR)법이나 파이로시컨싱 (Pyrosqeuncing)이라는 염기서열분석법을 통해 메틸화 여부를 확인합니다. 메틸화가 되지 않은 DNA는 아황산염에 의해 유전자 변형이 일어나서 증폭이 되지 않지만 DNA메틸화 된 유전자는 증폭이 됩니다.
아황산염을 사용하는 DNA 메틸화 검사는 많은 양의 DNA가 소요되므로 환자로부터 많은 양의 조직이나 혈액을 채취 해야 하는 부담이 크고, 아황산염에 의해 비특이적인 유전자 변형이 일어나 양성임에도 음성으로 나타나는 위음성율이 높아 정확한 결과를 얻기 힘듭니다. 또한 재현성이 낮아 3회 이상 반복실험이 필요하여 시간이 오래 걸리는 등 정확하고 신속한 분자진단에 적용하기 어려운 한계가 있습니다.
시선바이오머티리얼스의 Epi-TOP 기술은 세계 최초로 DNA 메틸화 검사에서 필수적으로 사용하는 bisufite 와 같은 화학물질을 사용한 샘플 전 처리 단계 없이 바로 유전자 증폭이 가능하며, 보편화 된 분자진단법인 실시간 중합 효소 연쇄반응법(Real time PCR)을 접목하여 간편하고 정확하게 메틸화 여부를 분석할 수 있는 획기적인 기술입니다. Epi-TOP 은 자체적으로 개발한 “Epi-sPNA” 프로브가 표적 유전자에 선택적으로 결합하여 유전자의 증폭을 선택적으로 억제하여 메틸화 된 유전자만 특이적으로 선별이 가능하며, 비메틸화 유전자의 Tm 값과 Ct 값을 비교하여 유전자 메틸화 여부 및 비율 측정이 가능합니다.
Epi-TOP 기술장점 - 신속함: 3 시간 내 DNA 메틸화 분석 완료
- 재현성: 한 번의 실험으로 결과 도출
- 편리성: Bisulfite 와 같은 샘플 전 처리 과정 없음
- 민감성: 메틸화 정도 0.05% 까지 안정적으로 검출
- 특이적: 비 메틸화 유전자에 대한 교차반응 없음
- 정확함: 검증된 알고리즘을 통한 분석
교모세포종 환자의 MGMT 메틸화 여부를 정성 하여 분자유전학적 분별진단에 도움을 주는 체외 진단의료기기
MMR 결핍으로 발병하는 산발성 종양 환자의 MLH1 프로모터 메틸레이션 검사 및 린치증후군 진단을 보조하는 체외진단용 의료기기
Epi-TOP MPP (Multidrug Prognosis & Prediction) Assay Panel은 난치성 암 종별 특이적인 DNA Methylation 바이오마커를 기반으로 면역항암제 및 약물항암치료제 반응성 예후/예측을 통해 치료 효율을 높이기 위한 유전학적 분별 진단에 도움을 주는 체외진단용 의료기기